DETECCIÓN SIMULTÁNEA LA MUTACIÓN FVQ506 DEL FACTOR V (LEIDEN) Y DE LA VARIACIÓN 20210A DEL GEN DE LA PROTROMBINA MEDIANTE PCR ESPECÍFICA DE ALELO (PCR-ASO).

Zúñiga, A.; Bonanad, S.; Vicente, A.; Arnao, M., y Cerón, J.A.
Lab. Biología Molecular. Área de Diagnóstico Biológico. Hospital de la Ribera. Ctra. Corbera, Km.1. 46600-Alzira (Valencia).

La mutación del factor V (Leiden) es uno de los factores de riesgo más importantes en el tromboembolismo venoso y la mutación G20210A del gen de la protrombina parece únicamente ser un factor moderado de riesgo en los procesos trombóticos. Ambas mutaciones se coheredan frecuentemente y la asociación de los alelos alterados multiplica el riesgo de aparición de procesos trombóticos. Hay una prevalencia alta de las dos mutaciones en la población por lo que el desarrollo de pruebas de diagnóstico molecular rápidas y económicas son de gran utilidad. Los métodos empleados hasta la fecha son muy fiables pero requieren siempre un análisis posterior a la PCR, como por ejemplo mediante la digestión enzimática, que encarecen y dilata mucho la obtención de resultados.

OBJETIVO. Utilización de una PCR multiplex para la detección simultánea de las mutaciones FVQ506 y PT 20210A; y desarrollo de una estrategia de screening para disminuir costes y tiempo de respuesta.

ANÁLISIS MOLECULAR. Análisis mediante PCR de la mutación puntual Arg506® Gln del gen del factor V y de la mutación G20210A del gen de la protrombina mediante amplificación específica del alelo mutado.

RESULTADOS.

1. La temperatura y la concentración de los cebadores resultan cruciales para la especificidad de la PCR-ASO; por lo que el uso de una mastermix en la que sólo hay que añadir el ADN y la Taq polimerasa resulta fundamental para que los ensayos sean homogéneos y fiables;
2. La estrategia de screening permite una reducción de costes de más del 50% al identificarse en un único paso los pacientes portadores de los alelos mutados;
3. El screening de alelos normales para el factor V y el gen de la protrombina sólo se realiza en los pacientes que han resultado portadores de algún alelo mutado, lo que conlleva un considerable ahorro de tiempo; y
4. Con la PCR-ASO se obtiene un resultado directo que no requiere de posterior análisis por digestión enzimática.

CONCLUSIÓN. El uso de una PCR-ASO multiplex permite un ahorro de más del 50% de coste económico y de casi un 90% en el tiempo de respuesta si se compara con el método tradicional que conlleva digestión enzimática, sin que por ello haya una pérdida de sensibilidad ni de especificidad.